Fiche 118. Les enzymes du génie génétique

La manipulation des ADN et des ARN nécessite l’utilisation d’enzymes très pures, stables et spécifiques
Elles permettent de couper les molécules d’ADN ou d’ARN en fragments ou en nucléotides. Les nucléases (ADNase, ARNase) non spécifiques peuvent être de type exonucléases (éliminant les nucléotides à partir d’une extrémité libre de l’acide nucléique) ou endonucléases (coupant les liaisons phosphodiester internes) des acides nucléiques simples brins et/ou doubles brins. Les nucléases utilisées en génie génétique sont :
l’ADNase1, endonucléase qui dégrade les molécules d’ADN simple ou double brin, utilisée pour éliminer l’ADN d’une préparation d’ARN ;
l’ARNase A, endonucléase dégradant spécifiquement l’ARN monocaténaire ;
l’Exo III d’E. coli, exonucléase qui coupe l’ADN double brin de 3′ → 5′ à partir d’extrémités 3′ franches ou 3′ entrantes. L’enzyme ne fonctionne pas sur des extrémités 3′ sortantes ;
l’ARNase H, endonucléase qui coupe les ARN des hybrides ARN/ADN ;
la nucléase S1 d’Aspergilus oryzae, endonucléase qui coupe les ADN et les ARN simples brins libérant des nucléotides 5′-monophosphate ou des oligonucléotides. Ainsi, la nucléase S1 éliminera : les extrémités cohésives pour donner des extrémités franches ; les mésappariements ; la boucle d’une structure tige-bouche.
Il existe trois types d’ER. Les types I et III ne sont pas intéressants pour la technologie de recombinaison car elles reconnaissent des sites non palindromiques et coupent à distance de ces sites…