Fiche 122. Les banques d’ADN

Une banque d’ADN est un ensemble de vecteurs contenant des fragments d’ADN divers représentatifs d’un type cellulaire, d’un génome.
En fonction de la taille des fragments d’ADN, divers vecteurs peuvent être utilisés (plasmides, phage, YAC, BAC…) Une banque est caractérisée par : le type de vecteur, la nature des inserts (ADN génomique, ADNc), leur origine, le pourcentage de vecteurs possédant un insert, la taille moyenne des inserts, la taille de la banque.
Une banque d’ADN génomique est constituée d’un ensemble de clones bactériens, chacun étant porteur d’une partie du génome, cloné dans un vecteur, d’un organisme donné. L’ensemble des clones d’une banque contient en théorie la totalité du génome d’un organisme donné.
Les ADNc sont des copies sous forme ADN de l’ARN messager (ARNm) mature. Ces copies sont réalisées par la transcriptase inverse. La banque est dans ce cas constituée exclusivement de séquences codantes.
La difficulté est d’obtenir des morceaux d’ADN génomique dont la taille soit compatible avec le clonage, les fragments trop petits ou trop gros n’étant pas incorporés et risquant d’introduire un biais dans la banque qui ne contiendra plus l’ensemble du génome de l’organisme.
L’ADN est fragmenté de façon aléatoire (figure 1) :
soit par coupure mécanique (sonication) ;
soit par digestion partielle par des enzymes de restriction. On obtient ainsi des fragments chevauchants.La première étape est l’isolement des ARNm qui serviront ensuite de matrice à la transcriptase inverse (une ADN polymérase) pour la synthèse d’un brin d’ADN complémen-taire à partir d’une amorce…