Exercices de synthèse

1.1 Décrire et discuter les caractéristiques chimiques du monde vivant. Quels en sont les avantages ?1.2 Comment séparer, caractériser, et doser les petites molécules contenues chez un organisme vivant ou dans un tissu biologique ? S’appuyer sur des exemples de molécules. Y a-t-il des techniques de séparation communes aux différentes classes de biomolécules de la matière vivante ; pourquoi ?2.1 Définir les paramètres d’une réaction enzymatique michaélienne et expliquer comment déterminer ces paramètres, propres à chaque enzyme, dans des conditions définies. Quel est l’intérêt de connaître ces paramètres ? S’appuyez sur des exemples. Quels sont les différents niveaux de régulation de l’activité enzymatique ?2.2 Structure et propriétés des protéines. Donner un exemple d’une enzyme à NAD(P+), sa réaction associée, et la mesure de son activité.
Un chercheur travaille sur le fragment protéique INE dont la séquence est la suivante (le fragment ADN contient un site PvuII (5’cag/ctg 3’)) :
PvuII
5’-aagcggtcatcatgggtcagctgctacactacacaatacgattgcatgggtgaaccacgtgac
Lys Arg Ser Ser Trp Val Ser Cys Tyr Thr Thr Gln Tyr Asp Cys Met Gly Glu Pro Arg Asp
gatagacagatccggatcgatttcccgatcaattgctacccttactaa-3’
Asp Arg Gln Ile Arg Ile Asp Phe Pro Ile Asn Cys Tyr Pro Tyr
Dans une expérience le chercheur décide de cloner ce fragment dans le vecteur pECT (figure suivante) en HindII.Le vecteur pECT permet d’exprimer une protéine fusionnée avec une étiquette (contenant entre autre une série de résidus histidine et un site digestion par la thrombine), qui sera utilisée pour faciliter la purification de la protéine de fusion sur une colonne nickel-agarose…